Till innehåll

Tabell 1: Minimikrav på testerytrocyter för antikroppsscreening

 
System Antigenuppsättning Förkortning Minsta antal testerytrocyter
Rh D+C+c−E−e+ *R1R1

1
D+C−c+E+e− *R2R2

1
Kell K+k+

1
K−k+

1
Duffy Fy(a+b−)

1
Fy(a−b+)

1
Kidd Jk(a+b−)

1
Jk(a−b+)

1
MNS #S+

1
#s+

1
M+

1
N+

1

*Zygositet på RHD bör bekräftas genomiskt. Cw, Kpa och Lua bör vara representerade.

#= testerytrocyter som saknar det antitetiska antigenet bör väljas.

   
 

Tabell 2: Minimikrav på testerytrocyter för antikroppsidentifiering

System Antigenuppsättning Förkortning

Minsta antal paneltesterytrocyter
Rh D+C+c−E−e+ *R1R1

1
D+C+CW+c−E−e+ *R1wR1

1
D+C−c+E+e− *R2R2

1
D−C+c+E−e+ r′r

1
D−C−c+E+e+ r″r

1
D−C−c+E−e+ rr

3
Kell K+k+

2
K−k+

1
Duffy Fy(a+b−)

1
Fy(a−b+)

1
Kidd Jk(a+b−)

1
Jk(a−b+)

1
MNS S+s−

1
S−s+

1
M+N−

1
M−N+

1

*Zygositet på RHD bör bekräftas genomiskt. Cw, Kpa och Lua bör vara representerade.

   
 

Tabell 3: Övriga tekniker vid antikroppsidentifiering

 
Teknik/Princip Indikation
37 oC: Celler och plasma värms innan de blandas Används för att eliminera antikroppar av köldtyp
Låg temperatur: Inkubering 4-20 oC, direkt agglutination Används för att upptäcka erytrocytantikroppar med lågt temperaturoptimum, då dessa ger ospecifika reaktioner med rutinteknik, oftast erytrocytantikroppar av IgM-typ
Rörteknik (IAT/direkt agglutination) Används för att identifiera förekomst av myntrullar Kan vara till hjälp med svaga autoantikroppar för att utesluta alloantikroppar utan att adsorbera patientens plasma Används även med svaga köldantikroppar
IAT/enzym, enzymbehandlade testerytrocyter (papain/ficin; Se tabell 5) Används för att förstärka svaga Rh- och Kidd-antikroppar Används även för att utreda förekomst av flera specificiteter av antikroppar då t. ex. MNS och Fya/Fyb blodgruppsantigen förstörs av papain och ficin
IAT/enzym, enzymbehandlade testerytrocyter (trypsin/chymotrypsin; Se tabell 5) Används för att utreda specificitet hos sällsynta antikroppar
Neutralisering av patientplasma med pool av plasma från blodgivare Används vid misstanke om erytrocytantikroppar mot antigen inom blodgruppssystemen Chido/Rodgers och Lewis (kliniskt ej betydelsefulla, antigenen finns lösligt i plasma)
Neutralisering av patientplasma med kommersiell substans Används vid misstanke om erytrocytantikroppar mot antigen inom blodgruppssystemet Lewis, samt mot P1 (kliniskt ej betydelsefulla, antigenen finns lösligt i plasma) Obs: andra lösliga proteiner finns, t.ex. Knops, Yt, Lutheran, CD38 som kan vara till nytta både vid antikroppsidentifiering och när antikroppar har fastställts för att utesluta andra antikroppar av klinisk betydelse
PEG lösning Används som tillsats för att förstärka svaga IgG-antikroppar
Eluering Eluering av antikroppar från DAT-positiva erytrocyter kan användas till: Utredning av hemolytisk transfusionsreaktion Utredning av hemolytisk sjukdom hos nyfödd Utredning av oklar DAT-positivitet Rening av antikroppar från en blandning
Auto-/alloadsorption Används för att ta bort autoantikroppar från patientplasma för vidare utredning Kan användas för att utreda anti-G Kan användas vid en utredning av multipla antikroppar eller antikroppar till en högfrekvensantigen
DTT behandling av erytrocyter (200 mM) Se även Tabell 5 Används vid utredning av patienter som behandlas med anti-CD38 (behandling vid myelom). Kan användas vid utredning vid misstanke om erytrocytantikroppar mot högfrekvent antigen då det förstör bl. a. Kell och Lutheran blodgruppsantigen.
DTT behandling av plasma (10 mM) Används för att förstöra antikroppar av IgM-klass och att diskriminera mellan IgG och IgM komponent av en antikroppspecificitet, t.ex. anti-A, -B eller anti-M
Användning av navelsträngsceller Används för att identifiera köldantikroppar Kan användas vid utredning av patienter som behandlas med anti-CD38 (behandling vid myelom)
Anti-IgG utan IgG4-specificitet Kan användas vid misstanke på erytrocytantikroppar mot JMH, Yta (som oftast är IgG4-antikroppar). Kan användas vid utredning av patienter som behandlas med anti-CD47 (behandling vid malignitet) av subklass IgG4.
   
 

Tabell 4: Kontrollrutiner immunhematologi

Typ av kontroll

Frekvens:

Manuell metod

Frekvens:

Automatiserad metod

Kommentar
Ankomstkontroll av reagens från tillverkare, ny batch och ny leverans Vid ankomst Vid ankomst Relevant kontroll skall utföras vid ankomst. Reagens för typning av ABO och RhD:
  • kända A, B, AB, RhD pos/neg skall användas.
Övriga reagens:
  • Positiv kontroll: testerytrocyt som har antigenet och det antitetiska antigenet.
  • Negativ kontroll: testerytrocyt som saknar antigenet
Beredningskontroll: egna testerytrocyter Vid beredning Vid beredning Förväxlingskontroll, suspensionsstyrka (EVF)
Stabilitetskontroll: egna testerytrocyter Minst en gång per vecka Minst en gång per vecka Positiv kontroll: ”Svag” antikropp som ger maximalt ++ reaktioner. Anti-Fya rekommenderas.

Blodgruppering och antikroppsscreening
Metodkontroll blodgruppering Vid manuell gruppering i serie ska metodkontroll inkluderas i varje serie. Minst vid uppstart av instrument och alltid vid byte av reagens. En känd A RhD neg/pos och en känd B RhD neg/pos ska användas
Metodkontroll antikroppsscreening Positiv kontroll minst en gång/dag Negativ kontroll behöver ej utföras Positiv kontroll minst vid uppstart av instrument och vid byte av testerytrocyter Negativ kontroll behöver ej utföras Antikroppsspecificiteter bör väljas så att varje screeningscell ger förväntat positivt och negativt resultat

Antikroppsidentifiering
IAT-LISS Enligt lokala rutiner Metodkontroll minst 1 g/vecka
IAT-PEG Varje laboration eller enligt lokal dokumenterad rutin Ej tillämpligt Positiv kontroll som kräver PEG för att visa förstärkt reaktivitet
Med enzymteknik Varje laboration eller enligt lokal dokumenterad rutin Ej tillämpligt Positiv kontroll som kräver enzym för att visa förstärkt reaktivitet
Kontroll med autologa erytrocyter Vid genomgående positiva reaktioner i aktuell metod Vid genomgående positiva reaktioner i automatiserad antikroppsidentifiering Plasma och autologa erytrocyter testas med samma metod som gett genomgående positiva reaktioner

Fenotypsbestämning
Vid rörteknik Varje laboration Positiv kontroll: Testerytrocyt som har antigenet och det antitetiska antigenet. Negativ kontroll: Testerytrocyt som saknar antigenet
När reagens tillsätts i t.ex. mikrokolonn Enligt leverantörens anvisning, och dokumenterad lokal rutin Minst enligt tillverkarens rekommendationer, och dokumenterad lokal rutin
Reagens tillsatta av tillverkaren Enligt leverantörens anvisning, och dokumenterad lokal rutin Minst enligt tillverkarens rekommendationer, och dokumenterad lokal rutin

Titerbestämning
Kontroll vid titerbestämning Prov med känd titer analyseras parallellt vid varje laboration eller enligt lokal dokumenterad rutin Enligt tillverkarens rekommendationer. Metodkontroll minst 1g/vecka

DAT och IAT
Kontroll vid DAT mikrokolonn Vid positiv reaktion: Som negativ kontroll analyseras autologa erytrocyter mot aktuellt diluent (kontrollbrunn) Vid positiv reaktion: Som negativ kontroll analyseras autologa erytrocyter mot aktuellt diluent (kontrollbrunn)
Kontroll vid IAT och DAT med rörteknik Varje laboration Ej tillämpligt Till rör med negativ reaktion sätts sensibiliserade kontrollerytrocyter

Förenlighetsprövning
Metodkontroll förenlighetsprövning (A, B, ev. D, och screeningsceller) Enligt lokala rutiner. Vid uppstart av instrument och vid byte av reagens. En känd A RhD neg/pos och en känd B RhD neg/pos ska användas Antikroppsspecificiteter bör väljas så att varje screeningscell ger förväntat positivt och negativt resultat
   
 

Tabell 5: Kontrollrutiner molekylärbiologiska analyser

Typ av kontroll Frekvens: Manuell metod Frekvens: Automatiserad metod Kommentar
Ankomstkontroll av reagens från tillverkare, ny batch och ny leverans Vid ankomst Vid ankomst En kontroll bestående av DNA med känd genotyp, ska alltid analyseras vid ibruktagande efter ankomst av reagens och vid byte av lotnummer.
Interna kontroller: Genomisk blodgruppstypning på cellulärt DNA
  • Vid CE-IVD märkta reagens sätts interna kontroller enligt tillverkarens anvisning och dokumenterad lokal rutin.
  • En kontroll som inte innehåller målsekvens, men som består av buffert/spädningsmedium eller vatten bör inkluderas vid varje analystillfälle för att utesluta kontamination.
Interna kontroller: Fetal RHD-bestämning på cellfritt DNA
  • Vid CE-IVD märkta reagens sätts interna kontroller enligt tillverkarens anvisning och dokumenterad lokal rutin.
Vid in-house metoder bör följande kontroller inkluderas:
  • Positiv kontroll: RHD pos DNA eller pool av plasma från RhD negativa gravida med RHD positivt foster.
  • Negativ kontroll: RHD neg DNA eller pool av plasma från RhD negativa individer.
  • Kontroll för DNA extraktion och amplifiering: en referensgen analyseras parallellt.
  • En kontroll som inte innehåller målsekvens, men som består av buffert/spädningsmedium eller vatten inkluderas för att utesluta kontamination.
Externa kontroller
Ett program för externa kvalitetskontroller bör om möjligt följas med syfte att säkerställa metodöverensstämmelse mellan flera laboratorier.
   
 

Tabell 6: Effekt av olika enzymer och DTT-behandling på blodgruppssystem och vissa högfrekventa antigen

 

Papain eller Ficin

Trypsin

α-chymotrypsin

200 mM DTT

 Blodgruppssystem/Antigen

-

-

-

+

 Ch/Rg, Xga

-

-

-

-

 In, JMH

-

-

+

+

 MN, EnaTS, Ge2, Ge4

+/-

+

-

+

 ‘N’, Ss

-

+

-

+

 Fya/Fyb, Fy6

+/-

+

-

-

 Yta

-

+

+

+

 EnaFS

+

-

-

+sv

 Lu, MER2, Knops

+

+

+

-

 Kell, Sc

+

-

+sv

-

 Do, Ge3

+

+

-

+sv

 Cromer

+

+

+sv

-

 LW

+

+

+

+

 Jk3, Fy3, Dib ,Coa, Ge3; Oka, P, LKE, Ata, Csa, Emm, Era, Jra, Lan, PEL

+

+

+

+/-

 Vel

+

+

+

++

 Kx

- = känslig; + =resistent; +/- = variabel; sv = försvagad jämfört med ursprunglig reaktion

   
 

Tabell 7: Översikt av alla blodgruppssystem samt immunglobulinklass och klinisk betydelse av antikroppar som oftast ses på ett transfusionsmedicinskt laboratorium

ISBT Nummer ISBT System symbol Gen namn (HGNC) Vanliga antigen Antikropp klass Klinisk betydelse av antikroppar
          Transfusion HDFN
001 ABO ABO A, B IgM>IgG Ja Ja
002 MNS GYPA, GYPB M, N, S, s, U M/N IgM S/s/U IgG Nej Ja M - sällan Ja
003 P1PK A4GALT P1 IgM Nej Nej
004 RH RHD; RHCE D, C, E, c, e, CW IgG Ja Ja
005 LU BCAM Lua, Lub IgG Ja Ja - Lindrig
006 KEL KEL K, k, Kpa, Kpb IgG Ja Ja
007 LE FUT3 Lea, Leb IgM>IgG Nej Lea - sällan
008 FY ACKR1 Fya, Fyb IgG Ja Ja
009 JK SLC14A1 Jka, Jkb IgG Ja Ja
010 DI SLC4A1 Dia, Dib, Wra IgG Ja Ja
011 YT ACHE Yta, Ytb IgG Sällan Nej
012 XG XG; CD99 Xga IgG Nej Nej
013 SC ERMAP Sc1, Sc2 IgG Ja Nej (DAT+)
014 DO ART4 Doa, Dob IgG Ja Nej (DAT+)
015 CO AQP1 Coa, Cob IgG Ja Ja
016 LW ICAM4 LWa, LWb IgG Ja Ja - Lindrig
017 CH/RG C4A, C4B Ch, Rg IgG Nej Nej
018 H FUT1; FUT2 H IgM>IgG Nej Oh fenotyp - Ja Nej
019 XK XK Kx IgG Ja i.a.
020 GE GYPC Ge2, Ge3 IgG Ja Ge2 - Nej (DAT+) Ge3 - Ja
021 CROM CD55 Cra, WESa, WESb IgG Sällan Nej
022 KN CR1 Kna, McCa, Sla IgG Nej Nej
023 IN CD44 Ina, Inb IgG Ja Nej (DAT+)
024 OK BSG Oka IgG Ja Nej
025 RAPH MER2 MER2 IgG Nej -
026 JMH SEMA7A JMH IgG Nej Nej
027 I GCNT2 I IgM>IgG Nej (autoak) Nej
028 GLOB B3GALNT1 P IgM>IgG Ja Ja
029 GIL AQP3 GIL IgG Ja Nej (DAT+)
030 RHAG RHAG Duclos, Ola IgG - -
031 FORS GBGT1 FORS1 IgM Nej Nej
032 ABCG2 ABCG2 Jra IgG Ja Ja
033 ABCB6 ABCB6 Lan IgG Ja Ja
034 SMIM1 SMIM1 Vel IgG Ja Ja
035 CD59 CD59 CD59.1 IgG - -
036 AUG SLC29A1 Ata IgG Ja Nej (DAT+)
037 KANNO PRNP KANNO IgG Nej Nej
038 SID B4GALNT2 Sda IgG Nej Nej
039 CTL2 SLC44A2 Rif, Ver IgG - -
040 PEL ABCC4 PEL IgG Nej Nej
041 MAM EMP3 MAM IgG Ja Ja
042 EMM PIGG EMM IgM>IgG Sällan -
043 ABCC1 ABCC1 WLF IgG - -
044 ER PIEZO1 Era, Erb IgG Ja Ja
045 CD36 CD36 CD36.1 IgG Nej fetalanemi
046 LIL ATP11C LIL IgG - -
047 MAL MAL AnWj IgG Ja Nej
- ingen information om signifikans    
 

Table 8. NPU/SWE-koder för immunhematologi analyser

NPU/SWE-kod Förkortad svensk IFCC/IUPAC-definition Måttenhet Rekommenderat rapportnamn Kommentar
Blodgruppering
NPU60301 B—Erytrocyt-antigen;kategori(ABO RhD;lista;proc) Blodgruppering
NPU01945 Erc(B)—Erytrocyt-antigen;kategori(ABO RhD;proc) Erc(B)—Blgr ABO RhD
NPU26690 P—Erytrocyt(ej ABO)-antikropp;arb konc(proc) P—Erytrocyt-ak screen
SWE05068 Erc(B)—Erytrocyt-antigen;kategori(ABO RhD;utan plasmagruppering;proc) Erytrocytgruppering T.ex. spädbarnsgruppering eller akutgruppering
NPU26678 Erc(B)—Erytrocyt-antigen;kategori(ABO RhD;verif;proc) Erc(B)—Blgr ABO RhD ktrl Kontrollgruppering
Förenlighetsprövning
NPU60302 B—Erytrocyt-ak;förenlighet(Erc;donationsID;lista;proc) Förenlighetsprövning
NPU21406 B—förenlighet(elekt);utgång(dat o kl;proc) B—BAS-test
NPU21913 P—Erytrocyt-ak;förenlighet(Erc;donationsID;proc) MG-test
NPU26696 Erytrocyt-ak(P)—förenlighet;utgång(dat o kl;proc) Prov för MG giltig tom BK(S)-test
Antikroppar
NPU21747 P—Erytrocyt-ak;arb konc(lista) Erytrocyt-ak undersökning
NPU20496 P—Erytrocyt D-ak;arb konc(37°C;proc) P—anti-D
NPU26688 P—Erytrocyt-okänd-antikropp;arb konc(37°C;proc) P—Erytrocyt-okänd-ak Ospecifika eller ej bestämbara fynd
NPU26691 P—Erytrocyt auto-ak;kategori P—Erytrocyt auto-ak
SWE05552 P—Erytrocyt-ak;egensk(proc) P—Erytrocyt-ak, bedömning Utlåtande i fritext
NPU21328 P—HPA-antikropp;arb konc(lista;proc) P—HPA-ak (lista)
NPU21329 P—HPA-1a-antikropp;arb konc(proc) P—HPA-1a-ak
NPU21764 P—HNA-antikropp;arb konc(lista;proc) P—HNA-ak (lista)
NPU21769 P—HNA-3a-antikropp;arb konc(proc) P—HNA-3a-ak
Titrering
NPU26765 P—Erytrocyt-ak;arb subst konc(lista;proc) Erytrocytantikropp titer
NPU20947 P—Erytrocyt D-ak;arb subst konc(20°C;proc) (pde) P—anti-D 20°C
NPU20948 P—Erytrocyt D-ak;arb subst konc(37°C;proc) (pde) P—anti-D
NPU57468 P—Erytrocyt A-ak och erytrocyt B-ak;arb subst konc(lista;proc) Titer anti-A, anti-B
NPU20880 P—Erytrocyt A-ak;arb subst konc(20°C;proc) (pde) P—anti-A 20°C
NPU20879 P—Erytrocyt A-ak;arb subst konc(37°C;proc) (pde) P—anti-A
NPU20889 P—Erytrocyt B-ak;arb subst konc(20°C;proc) (pde) P—anti-B 20°C
NPU20890 P—Erytrocyt B-ak;arb subst konc(37°C;proc) (pde) P—anti-B
Fenotypning
NPU20200 Erc(B)—Erytrocyt-antigen;arb ant(lista;proc) Erytrocytantigen lista
NPU21917 Erc(B)—Erytrocyt D-ag;arb ant(proc) Erc(B)—Blgr-ag D
NPU57742 Erc(B)—Erytrocyt partiellt D-ag;arb ant(proc) Erc(B)—Blgr-ag partiell D
NPU21341 Trc(B)—HPA-antigen;arb ant(lista;proc) Trc(B)—HPA-ag (lista)
NPU21342 Trc(B)—HPA-1a-antigen;arb ant(proc) Trc(B)—HPA-1a-ag
(koder för HNA-antigen saknas på svenska)
Genotypning
NPU27386 DNA(P)—RHD-gen;arb inneh(proc) Fetal RHD Fetal RHD-screening
NPU61133 DNA(spec)—ABO-gen;kategori(proc) DNA—ABO-gen
NPU61131 DNA(spec)—ACKR1-gen;kategori(proc) DNA—ACKR1-gen
NPU61128 DNA(spec)—GYPA-gen;kategori(proc) DNA—GYPA-gen
NPU61129 DNA(spec)—GYPB-gen;kategori(proc) DNA—GYPB-gen
NPU61130 DNA(spec)—KEL-gen;kategori(proc) DNA—KEL-gen
NPU61126 DNA(spec)—RHCE-gen;kategori(proc) DNA—RHCE-gen
NPU61127 DNA(spec)—RHD-gen;kategori(proc) DNA—RHD-gen
NPU61132 DNA(spec)—SLC14A1-gen;kategori(proc) DNA—SLC14A1-gen
NPU19305 DNA(spec)—RHD-gen;ent ant(0 1 2) DNA—RHD-gen RHD-zygositet
DAT
NPU20024 Erc(B)—Komplement+immunglobulin;arb ant(lista;proc) DAT
NPU20025 Erc(B)—Komplement+immunglobulin;arb ant(proc) Erc(B)—DAT kompl+Ig Polyspecifik DAT
NPU04070 Erc(B)—Immunglobulin G;arb ant(proc) Erc(B)—DAT IgG
NPU20027 Erc(B)—Komplement C3d;arb ant(proc) Erc(B)—DAT C3d
NPU26800 Erc(B)—Komplement C3c;arb ant(proc) Erc(B)—DAT C3c
NPU20028 Erc(B)—Immunglobuli A;arb ant(proc) Erc(B)—DAT IgA
NPU20034 Erc(B)—Immunglobulin M;arb ant(proc) Erc(B)—DAT IgM
Övrigt
NPU01966 P—Hemolysin, bifasisk;arb konc(proc) Donath-Landsteiner test
NPU01714 P—Köldagglutinin;arb konc(proc) P—Köldagglutinin
NPU08070 P—Köldagglutinin;arb subst konc(proc) (pde) P—Köldagglutinin Titer
SWE05554 Erc(B)—Th-antigen;arb ant(proc) Ery(B)—Th-ag
NPU61085 Erc(B)—Thomsen-Friedenreich-antigen;arb ant(proc) Ery(B)—T-ag
SWE05553 Erc(B)—Tk-antigen;arb ant(proc) Ery(B)—Tk-ag
NPU61086 Erc(B)—Tn-antigen;arb ant(proc) Ery(B)—Tn-ag
SWE05555 Erc(B)—Tx-antigen;arb ant(proc) Ery(B)—Tx-ag
   
 

Avläsning av immunhematologiska reaktioner

Beskrivning

++++ I mikrokolonnteknik: Alla erytrocyter ligger överst i kolonnen. I rörteknik: Ett enda agglutinat. I fast fas: Alla erytrocyter kläder hela brunnen i ett jämt lager.  
+++ I mikrokolonnteknik: De flesta erytrocyterna ligger överst i kolonnen. I rörteknik: Flera stora agglutinat. I fast fas: De allra flesta erytrocyterna kläder brunnens yta, några enstaka kan ligga mitt i brunnens botten.
++ I mikrokolonnteknik: Erytrocyter spridda i kolonnen. I rörteknik: Medelstora agglutinat och en del fria erytrocyter. I fast fas: Övervägande delen av erytrocyterna kläder brunnens yta, men             en mindre del ligger mitt i brunnens botten.
+ I mikrokolonnteknik: Huvudparten av erytrocyterna ligger i nedre tredjedelen av kolonnen. I rörteknik: Ett flertal små agglutinat och många fria erytrocyter. I fast fas: En knapp av erytrocyter framträder tydligt mitt i brunnens botten, men en del kläder brunnens yta.
(+) I mikrokolonnteknik: Huvudparten av erytrocyterna ligger i kolonnens botten, med en fåtal agglutinat som ligger en bit upp i kolonnen. I rörteknik: Huvudparten av erytrocyterna är fria med få små agglutinat som bekräftas oftast under mikroskop.
- I mikrokolonnteknik: Alla erytrocyter ligger i kolonnens botten. I rörteknik: Alla erytrocyter fria i suspensionsmediet. I fast fas: Alla erytrocyter ligger i en knapp mitt i brunnens botten.
Labbet bör kunna ange reaktion med blandbild enligt lokala instruktioner.  

 Kolonnagglutination

Reaktioner i kolonn får tolkas enligt tillverkares instruktioner.

Ej godkänd blodgruppskontroll vid BAS-test

 

Ej godkänd blodgruppskontroll vid BAS-test

 

 

 

Referenser